[中图分类号]R915.13 [文献标识码]B [文章编号]1672-4208(2009)23-0083-01
细菌感染性疾病是淡水养殖业的常见疾病，一般多采用抗菌药物防治此类疾病。养殖业抗菌药物的不恰当使用，使得许多软体动物来源的致病嗜水气单胞菌产生了耐药性。细菌耐药性可以通过多种方式在同一种属乃至不同种属细菌之间转移扩散，造成耐药菌株大量出现，严重威胁人类用药安全。质粒转移是细菌耐药性扩散的一种重要方式。笔者就分离自三角帆蚌的嗜水气单胞菌的耐药性以及质粒携带情况进行探讨，报道如下。
1 材料与方法
1.1 嗜水气单胞菌分离与鉴定 取有感染症状的三角帆蚌45只，无菌操作取肝脏组织并制备匀浆。将肝组织匀浆液接种于营养琼脂固体培养基上，35℃培养18 h，挑取可疑菌落，进行革兰氏染色以及氧化酶实验，同时接种微量生化反应管(杭州天和公司产品)，35℃培养24 h后观察结果，根据厂家提供的鉴定手册判断结果。根据细菌形态、染色性以及生化反应结果，鉴定得到31株嗜水气单胞菌。
1.2 药敏试验 采用K－B药敏纸片法分别测定31株嗜水气单胞菌对环丙沙星(CIP)、庆大霉素(GEN)、氯霉素(CAP)、妥布霉素(TOB)4种抗药物的敏感性，依据NC－CLS2001标准判读结果。
1.3 质粒提取碱裂解法质粒提取试剂盒购自爱思进生物技术公司(杭州)，DNA分子量标记h/HindⅢ为宝生物(大连)公司产品。质粒提取严格按照试剂盒说明书进行。质粒提取产物检测：取质粒提取产物9μl进行1％琼脂糖凝胶电泳，EB染色后紫外检测并拍照。
2 结果
2.1 药敏试验结果采用K－B法检测了31株嗜水气单胞菌对4种抗菌药物的敏感性，9株为敏感菌，22株为耐药菌。
2.2 质粒提取产物电泳结果碱裂解法提取31株嗜水气单胞菌携带的质粒，部分菌株质粒电泳结果显示，1、2、5泳道(3"、4"、10"菌株)出现了约9416 bp大小的DNA条带，表明相应菌株携带分子量为9416 bp的质粒；6泳道(11"菌株)出现了约9416 bp和4361 bp大小的2条DNA条带，表明相应菌株携带分子量为9416 bp以及4361 bp的2种质粒；7、8泳道(16"、30"菌株)出现了约9416 bp和1925 bp大小的2条DNA条带。表明相应菌株携带分子量为9416 bp以及1925 bp的2种质粒；3、4泳道(5"、9"菌株)未出现DNA条带，说明相应菌株未检出质粒。
2.3 嗜水气单胞菌耐药株质粒携带模式5株CIP单一耐药株均携带9416 bp质粒；10株CIP、GEN以及TOB多重耐药株中，8株携带9416 bp和4361 bp两种质粒，2株携带9416 bp和1925 bp两种质粒；7株CIP、GEN、CAP以及TOB多重耐药株中，1株携带9416 bp质粒，4株携带9416 bp和4361 bp两种质粒，2株携带9416 bp和1925 bp两种质粒。
3 讨论
在治疗人类细菌感染性疾病时，抗菌药物被列为处方药物，其使用受到严格控制，这在一定程度上阻止或延缓了耐药菌株的出现，保证了抗菌药物的有效性。但是，即使在这种严格的控制使用策略下，耐药菌株仍然层出不穷。
嗜水气单胞菌是水产养殖中的主要病原菌之一。养殖业广泛应用抗菌药物，加上监管及监测措施不严，使得抗菌药物滥用以及不当使用等现象在养殖业比较多见，导致许多软体动物来源的致病性嗜水气单胞菌产生了耐药性。本文结果显示，嗜水气单胞菌对环丙沙星、庆大霉素、氯霉素以及妥布霉素容易产生多重耐药性，多重耐药菌株比例达到54.9％。养殖过程中产生的耐药菌株可以在不同种属细菌之间播散，可以传播到人群。耐药菌株引起的感染使得抗菌药物治疗效果下降甚至无效，严重威胁人群用药安全。为了保障人群用药安全，应该重视抗菌药物在水产养殖中的正确使用，并加强监测。
质粒转移造成的细菌获得性耐药是耐药菌株大量出现的重要原因。在对环丙沙星、庆大霉素、氯霉素以及妥布霉素多重耐药菌株中，本文检测出9416 bp、4361 bp以及1925 bp3种质粒，携带2种质粒的多重耐药菌比例为94.1％(16/17)，而在对环丙沙星单一耐药菌株中仅检测出9416 bp质粒，对4种药物敏感的菌株中未检出质粒。以上结果提示，质粒引起的耐药性传播可能是造成多重耐药菌株高比例的一个重要原因。值得注意的是，综合本文结果可以推测9416bp质粒可能跟环丙沙星耐药有关，该质粒功能有待进一步研究。