DOI:10.3969/j.issn.1004-6755.2014.06.018
摘 要：对水产品等食品中磺胺类抗生素常用的分析方法和预处理方法进行了综述，归纳和比较了毛细管电泳法、微生物方法、液相色谱-质谱法、免疫法、气相色谱法、分光光度法、高效液相色谱法等特点。其中高效液相色谱法由于操作简便、快速、灵敏、准确的特点，是当前检测磺胺类抗生素的主要方法。同时，对包括固相萃取、分子印迹等预处理方法进行了综述。
关键词：磺胺类抗生素；抗生素残留分析；高效液相色谱法；分子印迹。
早在人类出现之前，细菌已经在不同的生态位发挥着重要的作用。在细菌中有相当小的比例是致病菌，它们能够给人类和动物的健康带来灾难性的影响。在治疗细菌感染的历史过程中，人类就发现了细菌和植物种类中有益的抗菌性，并开始利用具有抗菌活性的化合物来抑制细菌感染，而这些化合物大多是来自自然界。1929年，弗莱明在实验中偶然发现了青霉素，并且在牛津大学病理学教授弗洛里的进一步系统研究之后，抗生素的发展得到了大力推动[1]。青霉素在首次临床试验中，疗效效果十分惊人，从此抗生素进行大规模生产及商品化使用，并且在畜牧、水产品养殖等行业大面积使用。但随着抗生素商品化及平民化使用，过度及搭配不当地使用抗生素反而会危及人及动物的生命安全，同时也会造成环境污染。如：产生毒副作用[2]、致病菌产生耐药性[3]、继发性感染[4]、动物源性耐药菌对人类的危害[5]、影响环境微生物[6]、食品安全[7]。
1 磺胺类药物残留的检测分析方法
磺胺类药物（Sulfonamides，SAs）是比较常见的合成抗菌剂，普遍用于渔业养殖生产，主要有：磺胺嘧啶（Sulfadiazine，SDZ）、磺胺甲基嘧啶（Sulfamerazine，SM1）、磺胺二甲嘧啶（Sulfadimidine，SM2）、磺胺甲基异恶唑（Sulfamethoxazole，SMZ）等。它们主要用于治疗鱼类的赤皮病、肠炎、链球菌病、弧菌病、细菌性竖鳞病、赤鳍病、烂鳃病、鞭毛虫病、弧菌病、肠炎等等[8-9]。SAs的广泛应用，使鱼病的感染和传染方面得到了有效的控制。但是人们在享受着抗生素带给人们方便的同时，许多新的问题也伴随而来。像毒性反应、二重感染以及细菌产生耐药性等，尤其是在滥用的情况下能够产生排尿和造血紊乱等副作用[10]。因此大多数国家包括我国农业部、日本、欧盟、欧美和国际食品法典委员会（CAC）等都陆续规定了食品以及饲料中SAs的最大残留限量标准[11-12]。其中日本规定SM1为0.02 mg/kg，磺胺二甲氧嘧啶（Sulfadimethoxine，SDM）为0.04 mg/kg，SM2为0.01 mg/kg，其它按一律标准为0.01 mg/kg[13]。联合国食品法典委员会（CAC）、欧盟和欧美等国家规定水产品中磺胺类药物残留量不得超过0.1 mg/kg[14]。 我国农业行业标准《NY 5070—无公害食品水产品中渔 药残留限量》中规定，SAs在水产品组织中的最高残留总量限量为100 μg/kg。另外我国检测SAs标准还有SN0221-92，SN0208-93，GB/T20759-2006等。
目前，SAs残留的检测方法很多，主要有微生物方法、高效液相色谱法（HPLC）、毛细管电泳法、液相色谱-质谱法(HPLC-MS)、免疫法、气相色谱法（GC）、分光光度法等。其中高效液相色谱法简便、快速、灵敏、准确的特点是当前检测SAs的主要方法。表1为近年来常用的抗生素分析方法。
1.1 微生物方法
微生物方法是应用较为广泛的一种检测方法，尤其是在牛乳中抗生素残留的检测。微生物检测方法分为纸片法、亮黑还原法、TTC法、CHARM抑制法等[15]。该方法具有可直观、仪器设备成本和检测成本较低，但该方法的灵敏度和特异性与其它方法对比相对较低。其中酶标抗体检测法是目前一种趋向灵敏、准确、快速的新型微生物检测方法[16]。
1.2 高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）
高效液相色谱法（HPLC）是色谱法中一个重要的分支，也是目前应用最广泛的检测抗生素的方法。HPLC因载液流速快，固定相和流动相可以自主选择，所以具有分析速度快、分离效率高的特点，可以检测近70%的化合物。抗生素残留在色谱分析时最常用的检测方式有紫外-可见检测器（UV-Vis）电化学检测器（ECD）、荧光检测器（FLD）和二极管阵列全波长检测器（DAD）等。如刘勇[17]、ayas-Blanco[18]、Kunihiro Kishida[19]、方炳虎[20]等分别应用反相高效液相色谱法检测分析牛奶中SAs的残留，并采用乙腈提取SAs残留，获得了良好的分析效果。刘振伟等[21]以乙腈进行提取，HLB小柱净化，采用紫外-可见检测器在270 nm处进行检测，检测低限能够达到5 μg/kg，线性在25～300 μg/kg范围内良好。该类方法具有准确度高、精密度好、检测限低的特点。
1.3 毛细管电泳法（Capillary Electrophoresis，CE）
毛细管电泳法也是一种液相分离的技术，再用紫外-可见检测器扫描成电泳谱图，相对于高效液相色谱来说，CE的柱效更高，对于离子型化合物具有很好的分离效果，并提高了样品检测的分辨率。目前由于毛细管电泳和高灵敏度检测器的联用，灵敏度有了极大的提高[22-25]。如Ackermans等建立了毛细管带电泳法检测磺胺噻唑（Sulfathiazole，ST）、磺胺甲噁唑（Sulfamethoxazole，SMO）等15种SAs的残留分析方法[26]。但CE最大的不足是进样量过低，造成分析误差升高，并且进样的待测物受到限制，很难应用于痕量分析。
1.4 液相色谱-质谱法(HPLC-MS)
液相色谱-质谱法是液相色谱作为分离系统，质谱作为检测系统的一种结合方法。液质联用技术是色谱和质谱优势的互补，提高了对复杂样品的分离分析能力。HPLC-MS有如下几个特点：（1）分析范围广泛，可以检测绝大多数的化合物；（2）分离能力强，通过MS，能够按照特征离子质量可以将色谱中没有彻底分开的混合物进一步进行分离，并可以定性、定量分析；（3）检测限低；（4）分析时间快；（5）自动化程度高。如Casetta等建立了HPLC-MS/MS法测定了蜂蜜中SAs的方法[27]。
1.5 免疫学方法
免疫分析方法包括放射免疫分析法（Radioimmunoassay，RIA）、酶联免疫分析法（Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA）、固相免疫传感器、免疫亲和色谱（Immunoaffinity Chromatography，ICA）等。免疫学方法具有操作简便、分析成本低、灵敏度极高等优点。其中酶联免疫分析法更是由于特异性强、操作简便的特点使其成为最为常用的方法之一[28-30]。但由于免疫测定法大多数是以生物物质作为分子检测识别原件，这些物质不易长期保存，并且操作稳定性差，容易出现假阳性，因此不适合作为确证试验。